Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Некоммерческой организацией "Ассоциация производителей и потребителей масложировой продукции" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии документа, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 238 "Масла растительные и продукты их переработки"

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 сентября 2025 г. N 189-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 9 октября 2025 г. N 1176-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO/TS 22115-2025 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 мая 2026 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному документу ISO/TS 22115:2021 "Жиры и масла животные и растительные. Разделение классов липидов с помощью капиллярной газовой хроматографии (метод "отпечатка пальцев")" ["Animal and vegetable fats and oils - Separation of lipid classes by capillary gas chromatography (fingerprint method)", IDT].

Международный документ разработан Подкомитетом SC 11 "Животные и растительные жиры и масла" Технического комитета ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO) в сотрудничестве с Техническим комитетом CEN/TC 307 "Семена масличных культур, растительные и животные жиры и масла и их побочные продукты. Методы отбора проб и анализ" Европейского комитета по стандартизации (CEN) в соответствии с Соглашением о техническом сотрудничестве между ISO и CEN (Венское соглашение).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 Некоторые элементы настоящего стандарта могут быть объектом патентных прав. Международная организация по стандартизации (ISO) не несет ответственность за идентификацию каких-либо или всех патентных прав

Настоящий стандарт устанавливает метод полуколичественного анализа образцов животных и растительных жиров и масел, и масло-/жиросодержащих продуктов (жировые погоны дезодорации).

Применяется для идентификации масел, жиров и масло-/жиросодержащих продуктов с целью получения информации об основных (например, триглицеридах) и второстепенных (например, стеролах, эфирах стеролов, токоферолах, эфирах восков, жирных спиртах, глицерине) компонентах в рамках одного анализа. Для проведения достоверного количественного анализа заранее определенных классов соединений лучше использовать специальные методы.

Данный метод также может быть использован в качестве эффективного инструмента качественной идентификации для относительного сравнения составов образцов.

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт [для датированной ссылки применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированной - последнее издание (включая все изменения)]:

ISO 661, Animal and vegetable fats and oils - Preparation of test sample (Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания)

В настоящем стандарте отсутствуют термины и определения.

Гидроксилированные соединения превращаются в силильные производные. Данная реакция не влияет на неполярные (негидроксилированные) соединения, также присутствующие в образце. Подготовленный образец анализируют методом газовой хроматографии (ГХ) на высокотемпературной капиллярной колонке с малой толщиной пленки, с инжектором для ввода проб непосредственно в колонку и пламенно-ионизационным детектором.

Для количественного определения используют внутренние стандарты (1,2,3-тридеканоилглицерол), а коэффициенты отклика вычисляют по стандартному веществу для каждого класса соединений.

При проведении анализа, если не указано иное, используют только реактивы признанной аналитической степени чистоты и дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.

5.1 Смесь реагентов для силилирования: метилимидазол (CAS 616-47-7) и N-метил-N-триметилсилилгептафторбутирамид (MSHFBA) (CAS 53296-64-3).

Готовят смесь реагентов для силилирования: 1 см³ MSHFBA + 50 мм³ метилимидазола.

Примечание - Запрещается хранить данную смесь более одной недели по причине гигроскопичности. Силильные производные крайне чувствительны к влаге.

5.2 Стандартные вещества <1>.

--------------------------------

<1> Подходящие поставщики: Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com) или Larodan (www.larodan.com). Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой продукции данных поставщиков.

5.2.1 Олеиновая кислота (CAS 112-80-1).

5.2.2 1-моноолеин (CAS 111-03-5).

5.2.3 1,3-диолеин (CAS 2465-32-9).

5.2.4 Триолеин (CAS 122-32-7).

5.2.5 Тридеканоилглицерол (CAS 621-71-6).

5.2.6 Эйкозанол (CAS 629-96-9).

5.2.7 (CAS 10191-41-0), (CAS 54-28-4), (CAS 119-13-1).

5.2.8 Холестерол (CAS 57-88-5).

5.2.9 Холестерол пальмитат (CAS 601-34-3).

5.2.10 Сквален (CAS 111-02-4).

5.2.11 Смесь растительных стеролов <2> (CAS 474-67-9, 474-62-4, 83-48-7, 83-46-5).

--------------------------------

<2> Подходящий поставщик: Larodan (www.larodan.com). Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламной поддержкой продукции данного поставщика.

5.3 Изооктан, чистота 99% минимум, для анализа следовых количеств органических веществ.

5.4 Хлороформ для хроматографии.

Используют стандартное лабораторное оборудование, в том числе перечисленное ниже.

6.1 Мерная колба вместимостью 100 и 10 см³.

6.2 Термостат, позволяющий поддерживать температуру (103 +/- 1) °C.

6.3 Конические стеклянные виалы вместимостью 10 см³.

6.4 Газовый хроматограф для капиллярных колонок, оснащенный инжектором для ввода проб непосредственно в колонку или эквивалентным устройством, с программируемой температурой термостата хроматографической колонки и пламенно-ионизационным детектором (ПИД).

6.5 Капиллярная колонка из плавленого кварца, с возможностью программирования до 400 °C ("высокотемпературный" тип), для которой рекомендуются следующие характеристики: 100% диметилполисилоксана или 95% диметил/5% дифенилполисилоксана неподвижной фазы, длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм или 0,25 мм, толщина пленки 0,1 мкм. Допускается использование других колонок с аналогичной полярностью и селективностью.

6.6 Микрошприц вместимостью от 5 до 10 мм³, предназначенный для введения на колонку в газовой хроматографии.

6.7 Лабораторные весы, точность взвешивания 0,001 г.

6.8 Ультразвуковая ванна.

6.9 Испаритель в токе азота.

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в ISO 5555 [1].

В лабораторию следует направлять представительную пробу. Она не должна быть повреждена или изменена во время транспортирования или хранения.

Готовят пробу для испытания в соответствии с ISO 661.

8.1 Приготовление внутреннего стандарта, тридеканоилглицерола (5.2.5), c = 20 мг/см³

Взвешивают 200 мг тридеканоилглицерола (5.2.5) в мерной колбе вместимостью 10 см³, доводят до метки изооктаном (5.3).

Для каждого вещества готовят стандартный раствор в изооктане (5.3) концентрацией 5 мг/см³ (см. таблицу 1), чтобы определить коэффициент отклика для каждого класса соединений.

Добавляют 100 мм³ раствора внутреннего стандарта, тридеканоилглицерола (5.2.5), c = 20 мг/см³, и 200 мм³ раствора индивидуального стандартного вещества (каждый компонент отдельно) в виалу для силилирования (6.3) и выпаривают растворитель досуха в токе азота (6.9). Добавляют 100 мм³ смеси реагентов для силилирования (5.1). Выдерживают при температуре 103 °C в течение 15 мин в термостате (6.2), затем вносят 5 см³ изооктана (5.3).

При приготовлении следующего раствора рекомендуется проверить точность метода (необязательно).

В мерной колбе вместимостью 100 см³ (6.1) взвешивают приблизительно 50 мг каждого стандартного вещества (5.2) с 50 мг раствора внутреннего стандарта, тридеканоилглицерола (5.2.5), и доводят до 100 см³ хлороформом (5.4).

Такой раствор можно хранить при температуре окружающей среды в течение шести месяцев.

Чтобы раствор оставался однородным в течение долгого времени, перед использованием его необходимо поместить в ультразвуковую ванну на 10 мин.

Помещают в виалу для силилирования (6.3) 0,5 см³ раствора и высушивают в токе азота (6.9). Добавляют 100 мм³ смеси реагентов для силилирования (5.1). Выдерживают при температуре 103 °C в течение 15 мин в термостате (6.2), затем вносят 10 см³ изооктана (5.3).

Если образец имеет твердую консистенцию при комнатной температуре, необходимо полностью расплавить его в термостате при температуре 103 °C (6.2) и гомогенизировать.

В мерной колбе вместимостью 10 см³ (6.1) взвешивают приблизительно 100 мг пробы. Добавляют ровно 1 см³ раствора внутреннего стандарта (см. 8.1) и доводят до 10 см³ изооктаном (5.3).

Если проба не полностью растворима в изооктане, вместо него можно использовать хлороформ или толуол.

0,5 см³ раствора пробы (см. 8.5) помещают в виалу для силилирования (6.3) и выпаривают растворитель досуха в токе азота (6.9). Добавляют 100 мм³ смеси реагентов для силилирования (5.1). Выдерживают при температуре 103 °C в течение 15 мин в термостате (6.2), затем вносят 10 см³ изооктана (5.3).

Колонку устанавливают в газовый хроматограф и проверяют рабочие условия, вводя растворитель изооктан (5.3). Базовая линия должна быть прямой с небольшим положительным отклонением. Если отклонение велико, следует перейти к кондиционированию колонки. Если отклонение отрицательное, следует проверить соединения колонки.

Если колонка используется впервые, необходимо ее кондиционировать, нагревая ее в термостате с градиентом температуры до 370 °C (в зависимости от температуры термостата хроматографа, выбранной для анализа) в течение 4 ч. Температуру необходимо поддерживать в течение 2 ч.

В качестве предварительной колонки рекомендуется использовать пустую капиллярную колонку из плавленого кварца длиной 1 м и диаметром 0,5 мм. Условия для газового хроматографа, приведенные в таблице 2, дают приемлемые хроматограммы. Если инжектор позволяет использовать режим удаления растворителя, то рекомендуется его использовать.

Температурную программу и скорость потока газа-носителя оптимизируют таким образом, чтобы получить хроматограммы, аналогичные представленным на рисунках A.1 - A.10.

Идентифицируют пики с помощью стандартного раствора, приготовленного по 8.2. Типичные хроматограммы представлены в приложении A. Относительное время удерживания определяемых классов соединений приведено в таблице 3.

Если интересующий класс соединений присутствует в виде одного пика, используют интегрирование по обычным критериям. Для различных классов соединений не всегда достигается их разделение, поскольку могут присутствовать некоторые минорные (второстепенные) соединения. В этом случае рекомендуется интегрировать группу пиков вместе или объединить в общую сумму.

Готовят пробу для испытания в соответствии с ISO 661.

Рассчитывают коэффициент отклика F для каждого соединения, представляющего класс x, как указано в формуле

где F_x - коэффициент отклика соединения x, связанного с классом X;

m_IS - масса тридеканоилглицерола (внутренний стандарт), мг;

m_x - масса стандартного вещества, взятого для приготовления индивидуального стандартного раствора x, мг;

A_IS - площадь пика тридеканоилглицерола (внутренний стандарт);

A_x - площадь пика стандартного вещества, взятого для приготовления индивидуального стандартного раствора x.

Примеры ориентировочных коэффициентов откликов приведены в таблице 4.

Если коэффициенты отклика сильно отличаются от приведенных в таблице 4, например, это может произойти в отношении сквалена, рекомендуется использовать альтернативный внутренний стандарт, химически сходный с рассматриваемым соединением.

Массовую долю соединений из класса X рассчитывают по формуле (2)

где w_x - массовая доля соединений класса X (мг/100 мг);

F_x - коэффициент отклика соединения x, для класса этого соединения;

m_IS - масса тридеканоилглицерола (внутренний стандарт), мг;

A_IS - площадь тридеканоилглицерола (внутренний стандарт);

- сумма площадей соединений класса X;

m - масса пробы, мг.

Результаты межлабораторных испытаний по определению точности метода приведены в приложении B. Значения, полученные на основании этих межлабораторных испытаний, не могут применяться к диапазонам значений и матрицам, отличным от приведенных.

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых единичных испытаний, полученными при использовании одного и того же метода, на идентичном испытуемом материале, в одной лаборатории, одним оператором, на одном и том же оборудовании, в пределах короткого промежутка времени, будет не более чем в 5% случаев превышать значение предела повторяемости r, приведенное в таблице B.1.

Абсолютное расхождение между результатами двух единичных испытаний, полученными при использовании одного и того же метода, на идентичном испытуемом материале, в разных лабораториях, разными операторами, на различном оборудовании, будет не более чем в 5% случаев превышать значение предела воспроизводимости R, приведенное в таблице B.1.

Протокол испытаний должен включать:

a) всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

b) используемый метод отбора проб, если он известен;

c) используемый метод анализа вместе со ссылкой на настоящий стандарт;

d) все подробности, не указанные в этом стандарте или рассматриваемые как необязательные, а также данные о любых инцидентах, которые могли повлиять на результаты анализа;

e) полученные результаты анализа;

f) или окончательный результат, если соблюдены условия повторяемости.

См. примеры хроматограмм на рисунках A.1 - A.10.

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Идентификация пиков:

Международное совместное испытание при участии 6 лабораторий (из 19 подавших заявок) в 5 странах было проведено на пяти образцах масла. Испытание было организовано Инновационным Центром Bunge Katalin и полученные результаты были подвергнуты статистическому анализу в соответствии с ISO 5725-1 [2] и ISO 5725-2 [3] для предоставления точных данных, приведенных в таблицах B.1 - B.9.