Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским государственным предприятием "Казахстанский институт стандартизации и метрологии" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства торговли и интеграции Республики Казахстан

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 27 июля 2020 г. N 57-2020)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 апреля 2025 г. N 283-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO/TS 17383-2020 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2025 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному документу ISO/TS 17383:2014 "Определение состава триацилглицеролов в жирах и маслах. Определение методом капиллярной газовой хроматографии" ("Determination of the triacylglycerol composition of fats and oils - Determination by capillary gas chromatography", IDT).

Международный документ подготовлен Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 34, подкомитетом SC 11 "Животные и растительные жиры и масла" Международной организации по стандартизации (ISO).

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного документа для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (подраздел 3.6).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного международного стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт устанавливает метод качественного и полуколичественного определения отдельных триацилглицеролов жиров, масел и жировых смесей в растительных маслах и животных жирах с применением капиллярной газовой хроматографии. Разделение триацилглицеролов основано на их удерживании в зависимости от числа атомов углерода жирных кислот в триацилглицеролах и степени их ненасыщенности.

Требования настоящего стандарта применимы к животным и растительным жирам и их смесям (натуральные и синтетические триацилглицеролы) при условии, если:

- жирнокислотный состав масла не содержит значительного количества линоленовой кислоты (например, льняное масло) и

- общая длина цепи не превышает общее углеродное число C60.

Примечание - При получении количественных результатов необходимо проверить факторы отклика нескольких триацилглицеролов, так как увеличение ненасыщенности триацилглицеролов снижает чувствительность.

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт [для датированной ссылки применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированной - последнее издание (включая все изменения)]:

ISO 661, Animal and vegetable fats and oils - Preparation of test sample (Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания)

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 доля триацилглицерола или триацилглицерольной группы (proportion of the triglyceride or triglyceride group): Состав смеси триацилглицеролов, выраженный в процентах от общей суммы площадей пиков триацилглицеролов, принятой за 100%.

Триацилглицеролы с различной полярностью разделяются посредством капиллярной газовой хроматографии на высокополярной неподвижной фазе без дополнительной подготовки пробы. После нормализации всех площадей пиков содержание соответствующих триацилглицеролов выражается в виде процентной доли от суммы всех площадей пиков.

Если не указано иное, используют реактивы чистые для анализа.

5.1 н-Гексан аналитической степени чистоты.

5.2 Диэтиловый эфир аналитической степени чистоты.

5.3 Смесь растворителей, состоящая из гексана (объемная доля 87%) и диэтилового эфира (объемная доля 13%).

5.4 Изооктан аналитической степени чистоты.

5.5 Эталонные вещества, триацилглицеролы, такие как трипальмитин, тристеарин, триолеин и другие, а также растительные и животные жиры известного состава.

5.6 Синтетический воздух, пригодный для газовой хроматографии.

5.7 Водород для газовой хроматографии

6.1 Виалы для проб, предназначенные для газовой хроматографии.

6.2 Газовый хроматограф (ГХ), оснащенный колонкой с системой холодного ввода и пламенно-ионизационным детектором (ПИД).

Примечание - Альтернативной системой ввода пробы может быть инжектор для ввода пробы с делителем потока, испаритель с программируемой температурой или инжектор с подвижной форсункой при условии, что будут получены те же результаты, что указаны в приложении A.

6.3 Удовлетворительное разделение и идентификация достигаются при соблюдении следующих условий:

- колонка для высокотемпературной капиллярной ГХ из кварцевого стекла с привитой фазой из термоустойчивого фенилметилполисилоксана (от 50% до 65%), с длиной от 25 до 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм и толщиной пленки от 0,1 до 0,15 мкм;

- программирование температуры: 100 °C в течение 1 мин (начальная температура), от 100 °C до 325 °C со скоростью 30 °C/мин, от 325 °C до 345 °C со скоростью 1 °C/мин, от 345 °C до 370 °C со скоростью 5 °C/мин, 370 °C в течение 5 мин (конечная температура);

- газ-носитель: водород (степень чистоты не менее 99,999%).

Примечание - Следует использовать рабочие характеристики и тип колонки ГХ, чтобы были получены те же результаты, что указаны в приложении A.

6.4 Микрошприц для ГХ, обеспечивающий объем ввода от 0,001 до 0,002 см³.

6.5 Пипетки градуированные объемом 1 см³.

6.6 Весы аналитические с ценой деления 0,1 мг.

6.7 Колбы мерные объемом 10 см³.

6.8 Силикагелевые картриджи для твердофазной экстракции с массой сорбента 1 г, объем картриджа 6 см³.

6.9 Испаритель ротационный.

6.10 Микропипетка.

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть репрезентативной, не поврежденной или измененной при транспортировке или хранении.

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в ISO 5555.

Подготовку пробы для испытаний осуществляют в соответствии с ISO 661.

Твердые и полутвердые жиры медленно нагревают до температуры чуть выше температуры плавления до наступления прозрачности и тщательно перемешивают. Нерастворимые вещества отделяют путем фильтрования.

Пробу, содержащую в больших количествах моноглицеролы, диглицеролы, свободные жирные кислоты или полимеризованные жиры, предварительно разделяют с помощью препаративной колоночной хроматографии:

- промывают силикагелевый картридж (6.8) с использованием 6 см³ гексана;

- коническую колбу помещают под картридж;

- пропускают через колонку раствор пробы (0,12 г) в 0,5 см³ гексана (5.1);

- элюируют фракцию триацилглицеролов 10 см³ смеси растворителей (5.3) гексан/диэтиловый эфир (87:13 об/об);

- выпаривают досуха элюированный растворитель на роторном испарителе (6.9) при пониженном давлении и комнатной температуре.

Примечание - Очистка масла может также осуществляться с использованием колонки с силикагелем в соответствии с ISO 8420.

Готовят раствор пробы в изооктане (5.4) с концентрацией примерно 0,50 мг/см³. Взвешивают 50 мг пробы в мерную колбу (6.7) вместимостью 10 см³ и доводят до метки изооктаном (5.4). 1 см³ полученного раствора пипеткой переносят в мерную колбу вместимостью 10 см³ (6.7) и доводят до метки тем же растворителем. Вводят 0,001 см³ полученного раствора пробы в систему ГХ с использованием инжектора холодного ввода в колонку.

Рабочие (температурные) условия, используемые для разделения C50-триацилглицеролов (POP/PLP), C52-триацилглицеролов (POP/PLP/PLO) и C54-триацилглицеролов (SOO/OOO/OLO), должны соответствовать приведенным в приложении A.

Для идентификации пиков на газовой хроматограмме относительное время удерживания, например трипальмитина, сравнивают со временем удерживания определяемых веществ.

Триацилглицеролы выходят на хроматограмме в порядке возрастания числа атомов углерода и увеличения ненасыщенности триацилглицеролов с тем же числом атомов углерода. Порядок элюирования триацилглицеролов показан на примере хроматограмм (приложение A).

Готовят раствор - приблизительно 0,1 мг/см³ эталонных веществ (5.5) в изооктане (5.4). Взвешивают 50 мг пробы в мерную колбу вместимостью 10 см³ (6.7) и доводят до метки изооктаном (5.4). Отбирают микропипеткой 0,2 см³ (6.10) полученного раствора и переносят в мерную колбу вместимостью 10 см³ (6.7) и доводят до метки тем же растворителем.

Вводят 0,001 см³ готового раствора в ГХ-систему с использованием инжектора холодного ввода в колонку.

Вычисляют фактор отклика как отношение площади трипальмитина к площади определяемого триацилглицерола по формуле:

где F_TGi - фактор отклика i-го триацилглицерола;

A_TGi - площадь пика i-го триацилглицерола;

A_PPP - площадь пика трипальмитина.

Состав смеси вычисляют в процентах от площади, объединяя все пики, присутствующие на хроматограмме. Неизвестные пики суммируют как "другие ТАГ (триацилглицеролы)". Условием для расчета посредством сведения суммы площадей пиков к 100% является предположение, что все группы триацилглицеролов, содержащиеся в пробе, полностью разделены посредством газовой хроматографии при аналогичном отклике.

Расчет отдельных групп триацилглицеролов осуществляется по формуле (2):

где C_TGi - доля i-го триацилглицерола или группы i-х триацилглицеролов, %;

A_TGi - площадь пика i-го триацилглицерола;

A_T - сумма площадей пиков всех триацилглицеролов .

Примечание - При количественном анализе корректировка площадей пика посредством фактора отклика не является необходимой при условии, что оценка факторов отклика демонстрирует значения для триацилглицеролов, присутствующих в пробе, ниже или равные 1,2. В качестве примера фактор отклика для триолеина, равный 1,18.

Подробная информация о межлабораторных испытаниях точности метода приведена в приложении B. Значения, полученные в результате данных межлабораторных испытаний, могут быть не применимы к диапазонам концентраций и веществ, отличных от приведенных в приложении.

Предел повторяемости (r) является значением, меньшим или равным абсолютной разности между двумя результатами испытаний, полученными в условиях повторяемости с вероятностью в 95%. Условия повторяемости - это условия, при которых независимые результаты получены одним и тем же методом, на идентичных образцах, в одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором с использованием одного и того же оборудования за короткий промежуток времени.

Предел воспроизводимости (R) является значением, меньшим или равным абсолютной разности между двумя результатами испытаний, полученными в условиях воспроизводимости с вероятностью в 95%. Условия воспроизводимости - это условия, при которых независимые результаты испытаний получаются одним и тем же методом на идентичных образцах в разных лабораториях разными операторами, использующими разное оборудование за короткий промежуток времени.

Протокол испытаний должен содержать:

- информацию о методе, в соответствии с которым осуществлялся отбор проб (при наличии данных);

- используемый метод;

- результаты испытаний;

- при проверке повторяемости - окончательные приведенные результаты.

Также следует привести сведения об условиях испытания, не указанных в настоящем стандарте или рассматриваемых как необязательные, а также о любых обстоятельствах, которые могли повлиять на результат.

Протокол испытаний должен включать информацию, необходимую для полной идентификации пробы.

См. рисунки A.1 - A.5, на которых представлены образцы хроматограмм.

Условные обозначения:

P - пальмитиновая;

S - стеариновая;

O - олеиновая;

L - линолевая;

Ln - линоленовая.

Условные обозначения:

P - пальмитиновая;

S - стеариновая;

O - олеиновая;

L - линолевая;

Ln - линоленовая.

Условные обозначения:

P - пальмитиновая;

S - стеариновая;

O - олеиновая;

L - линолевая;

Ln - линоленовая.

Условные обозначения:

P - пальмитиновая;

S - стеариновая;

O - олеиновая;

L - линолевая;

Ln - линоленовая.

Условные обозначения:

P - пальмитиновая;

S - стеариновая;

O - олеиновая;

L - линолевая;

Ln - линоленовая.

Статистические результаты (определенные по ISO 5725) межлабораторного испытания, проводимого на международном уровне в 2012 году во Франции (ITERG) с участием восьми лабораторий, каждая из которых выполняла два определения на каждом образце, приведены в таблицах B.1 - B.11.

Идентификация образца:

Образец 1: рафинированное рапсовое масло.

Образец 2: рафинированное подсолнечное масло.

Образец 3: прокаленное кунжутное масло.

Образец 4: оливковое масло первого отжима.

Образец 5: нерафинированное пальмовое масло.