Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским государственным предприятием "Казахстанский институт стандартизации и сертификации" на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства торговли и интеграции Республики Казахстан

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 июня 2020 г. N 131-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 апреля 2025 г. N 281-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 12996-3-2020 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2025 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 12966-3:2016 "Жиры и масла животные и растительные. Газовая хроматография метиловых эфиров жирных кислот. Часть 3. Получение метиловых эфиров с применением гидроксида триметилсульфония (ГТМС)" ["Animal and vegetable fats and oils - Gas chromatography of fatty acid methyl esters - Part 3: Preparation of methyl esters using trimethylsulfonium hydroxide (TMSH)", IDT].

Международный стандарт подготовлен Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 34, подкомитетом SC 11 "Животные и растительные жиры и масла" Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочного международного стандарта соответствующий ему межгосударственный стандарт, сведения о котором приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Настоящий стандарт устанавливает ускоренный метод переэстерификации жиров и масел с использованием гидроксида триметилсульфония (ГТМС), катализируемого основанием, для приготовления метиловых эфиров жирных кислот. Метод применим только при подготовке метиловых эфиров жиров и масел для газожидкостного хроматографического (ГЖХ) анализа. Он применим ко всем жирам и маслам, за исключением жиров, полученных из молока и молочной продукции.

Изомеризация ненасыщенных жирных кислот происходит в незначительной степени, а изомеризованные жирные кислоты присутствуют в незначительных концентрациях ниже предела измерений. Поскольку изомеризация имеет место, процедура не рекомендуется для конъюгированной линолевой кислоты (КЛК).

От 70% до 80% свободных жирных кислот эстерифицируются. В случае конъюгированных циклопропиловых и циклопропениловых жирных кислот могут возникать побочные реакции, не мешающие определению жирных кислот.

Примечание - Настоящий стандарт основан на немецком стандартном методе C-VI 11e (98) [8].

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт [для датированной ссылки применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированной - последнее издание (включая все изменения)]:

ISO 661, Animal and vegetable fats and oils - Preparation of test sample (Жиры и масла животные и растительные. Приготовление пробы для испытания)

Пробу растворяют в трет-бутилметиловом эфире (ТМБЭ) и смешивают с раствором гидроксида триметилсульфония в метаноле. Глицериды подвергают щелочному катализу, происходит переэстерификация и образуются метиловые эфиры жирных кислот [4] - [8].

Свободные жирные кислоты превращаются в соли, которые пиролизуются в инжекторе в метиловые эфиры и диметилсульфид. Избыток реагента при пиролизе разлагается на метанол и диметилсульфид. Для получения полной пиролитической реакции необходим горячий инжектор (делитель потока) при минимальной температуре 250 °C.

Для определения короткоцепочечных жирных кислот (от C₄ до C₈) в качестве внутреннего стандарта используется метиловый эфир валериановой кислоты. Липиды, содержащие гидроксигруппы, частично превращаются в производные O-метилового эфира, которые могут оказывать мешающее влияние на метиловые эфиры жирных кислот при ГЖХ разделении [9]. В начале хроматограммы (область C₄) могут наблюдаться пики растворителя, свидетельствующие о реакции. Эти пики не принимаются во внимание.

Используют только реактивы признанной аналитической степени чистоты, если не указано иное.

4.1 Трет-бутилметиловый эфир (ТМБЭ).

4.2 Гидроксид триметилсульфония (ГТМС), концентрация 0,2 моль/дм³ в метаноле.

Концентрацию раствора можно определить ацидиметрически: разбавить 5,0 см³ раствора 10 см³ метанола, добавить две капли фенолфталеина и титровать в 0,1 моль/дм³ соляной кислоты. Концентрация должна быть не менее 0,15 моль/дм³.

Примечание - Раствор может храниться 2 месяца при температуре 4 °C в закрытых пробирках.

Стандартное лабораторное оборудование.

5.1 Пробирки вместимостью 2 см³ (виалы для автоматического дозатора).

5.2 Мерные пипетки вместимостью 0,25, 0,5 и 1 см³, класс A по ISO 835 [1].

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть репрезентативной, не поврежденной или измененной при транспортировке или хранении.

Отбор проб не является частью метода, установленного в настоящем стандарте.

Рекомендованный метод отбора проб приведен в ISO 5555 [3].

Проба должна быть жидкой, сухой и прозрачной. Подготовку пробы проводят в соответствии с ISO 661 с нагревом чуть выше ее температуры плавления. Твердые пробы аккуратно расплавляют при температуре выше температуры плавления не более чем на 10 °C и перемешивают. Следует избегать перегрева.

Пробы, содержащие воду, растворяют в петролейном эфире и высушивают в течение 30 мин при помощи добавления безводного сульфата натрия.

Осушающий реагент удаляют фильтрацией через фильтровальную бумагу, осадок тщательно промывают петролейным эфиром. Растворитель затем удаляют с помощью ротационного испарителя.

8.1 В пробирку вместимостью 2 см³ помещают навеску (10 +/- 2) мг пробы для испытания.

8.2 К навеске пипеткой (5.2) вносят 0,5 см³ ТМБЭ в пробирку и растворяют ее, осторожно нагревая (при необходимости).

Примечание - Для определения короткоцепочечных жирных кислот (от C₄ до C₈) в качестве внутреннего стандарта используется метиловый эфир валериановой кислоты. Раствор внутреннего стандарта используют для растворения пробы.

8.3 В полученный раствор пипеткой (5.2) добавляют 0,25 см³ раствора (ГТМС) (4.2) и интенсивно встряхивают в течение 30 с. Затем готовый раствор вводят (инжектируют) в газовый хроматограф. Так как метиловые эфиры образуются в процессе впрыска, температура инжектора должна быть не менее 250 °C.

При необходимости раствор разбавляют смесью МТБЭ и метанола (9:1).

Протокол испытаний должен содержать следующую информацию:

a) результат определения;

b) данные об используемом методе и ссылку на настоящий стандарт;

c) всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

d) сведения об условиях испытания, не указанных в настоящем стандарте или рассматриваемых как необязательные, а также о любых обстоятельствах, которые могли повлиять на результат(ы).